考马斯亮蓝染色原理

2017-05-11

       

 bca法是常用蛋白浓度测定方法之一。其他蛋白浓度测定方法还有考马斯亮蓝法、bradford法测蛋白浓度等。本文是用bca法测定蛋白浓度。是使用索莱宝BCA蛋白浓度测定试剂盒完成本实验。

下面是bca法测蛋白浓度步骤:

1. 标准曲线的绘制:取一块酶标板,按照下表加入试剂 ;

2. 根据样品数量,按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液,充分混匀;    

3. 各孔加入200μL BCA工作液;    

4. 把酶标板放在振荡器上振荡30sec,37℃放置30分钟,然后在562nm下比色测定。以蛋白含量(μg)为横坐标,吸光值为纵坐标,绘出标准曲线;   

5. 稀释待测样品至合适浓度,使样品稀释液总体积为20μL,加入BCA工作液200μL,充分混匀,37℃放置30分钟后,以标准曲线0号管做参比,在 562nm波长下比色,记录吸光值;     

6. 根据所测样品的吸光值,在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量(μg),除以样品稀释液总体积(20μL),乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度(单 位:μg/μL)。

【bca法优缺点】 

(一) 操作简单,快速,45分钟内完成测定,比经典的Lowary法快4倍且更加方便; 

(二) 准确灵敏,试剂稳定性好,BCA试剂的蛋白质测定范围是20-200μg/ml,微量BCA测定范围在0.5-10μg/ml。 

(三) 经济实用,除 试管 外,测定可在微板孔中就进行,大大节约样品和试剂用量; 

(四) 抗试剂干扰能力比较强,如去垢剂,尿素等均无影响


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